PRAKTEK PEWARNAAN GRAM | asalshareinfo

PRAKTEK PEWARNAAN GRAM

1. Apakah anda sudah pernah melakukan pewarnaan Gram? 

Lakukan pewarnaan dengan mengikuti prosedur sebagai berikut: 

a. Bahan  

 Kaca obyek bersih 

 Pensil lilin atau spidol 

 Lup inokulasi 

 Suspensi campuran sel- sel muda Escherichia coli dan Staphylococcus aureus (berumur 15- 18 jam) 

 Biakan murni Serratia marsescens yang telah di isolasi 

 Biakan murni Micrococcus luteus  

 Biakan Bacillus subtilis dan kaldu nutrien 

 Seperangkat pewarna gram: ungu kristal, larutan iodium gram, alkohol 95%, safranin 

 Bak warna 

 Air suling dalam botol pijit 

 Kertas serap 

 Mikroskop 

 Minyak celup dan kertas lensa 

b) Prosedur 

 Sediakan 4 buah kaca obyek yang bersih 

 Dengan mengikuti cara- cara penyiapan olesan yang baik , Siapkan  olesan bakteri pada keempat buah kaca obyek tersebut sebagai berikut: 

- Siapkanlah 2 olesan pada setiap kaca obyek. Jarak antara kedua olesan tersebut paling sedikit 2 cm 

- Salah satu dari kedua olesan itu sama bagi keempat kaca obyek, yaitu olesan disiapkan  dari suspensi campuran sel–sel muda  E. coli dan S. aureus, olesan  ini berfungsi sebagai kontrol 

- Olesan kedua pada masing –masing kaca obyek adalah : 

· Olesan S. marcescens pada kaca  obyek pertama 

· Olesan M.luteus pada kaca obyek kedua 

· Olesan B.subtilis berumur 18 jam pada obyek ketiga 

· Olesan B. subtilis berumur 72 jam pada kaca obyek keempat 

Tandailah setiap olesan pada masing – masing kaca obyek supaya anda tahu apa yang akan anda amati nanti 

c) Setelah selesai difiksasi panas, letakkan kaca- kaca obyek tadi di atas rak kawat pada bak pewarna. Dengan berpedoman gambar berikut ini, lakukanlah pewarnaan Gram sebagai berikut : 

 Genangi olesan bakteri dengan pewarna primer yaitu ungu kristal selama 1 menit 

 Dengan menggunakan pinset atau penjepit lain, miringkanlah kaca obyek di atas bak pewarna untuk membuang kelebihan ungu kristal, lalu bilaslah olesan dengan air dari botol pijit/botol pembersih 

  Tiriskan kaca obyek (dengan cara menegakkan sisi- sisi yang sempit kaca obyek tersebut di atas kertas serap) dan kembalikan ke atas rak  kawat pada bak  pewarna 

 Genangi olesan dengan iodium gram selama 2 menit 

 Miringkan kaca obyek  untuk membuang kelebihan iodium lalu bilaslah olesan dengan air dari botol pijit 

  Cucilah olesan dengan pemucat warna yaitu etanol 95 %, tetes demi tetes selama 30 detik atau sampai zat warna ungu kristal tidak terlihat lagi mengalir dari kaca obyek 

 Cucilah segera dengan air dari botol pijit, lalu tiriskan  dan kembalikan ke atas rak kawat pada bak pewarna 

 Genangi olesan dengan pewarna tandingan yaitu safranin selama 30 detik, 

   Miringkan  kaca obyek ,untuk membuang kelebihan safranin, lalu bilaslah olesan dengan air dari botol pijit 

  Tiriskan kaca obyek dan seraplah kelebihan air pada olesan dengan menekankan kertas serap hati- hati keatasnya   

Gambar 33. Gambar Prosedur Pewarnaan Gram 

(Sumber : Mikrobiologi dalam praktik hal, 102) 

c) Pengamatan  

Amati masing-masing preparat di bawah mikroskop dengan obyektif celup minyak tanpa kaca tutup (mulailah dengan obyektif berkekuatan terendah dan berangsur–angsur diganti dengan yang berkekuatan tinggi ) . Pada setiap preparat mula- mula amatilah olesan kontrol, karena olesan ini merupakan ukuran bagi ketepatan teknik pewarnaan anda. Bila teknik anda baik , maka S.aureus akan berwarna biru gelap atau ungu (Gram positif ) dan E. coli akan berwarna merah muda  (Gram negatif)  . Baru kemudian anda mengamati olesan yang lain. Gambar dan beri keterangan dan warna yang sesuai gambar anda amati.

Presentasikan laporan hasil pengamatan anda di depan kelas dan apabila ada yang belum jelas tanyakan kepada guru